Cholesterin ist eine natürliche organische Steroid- und Alkoholverbindung, die in Zellmembranen gefunden wird, wo es eine wesentliche strukturelle Komponente von Säugetierzellmembranen darstellt und die Funktion hat, eine geeignete Membranpermeabilität und Fluidität zu etablieren. Darüber hinaus ist Cholesterin ein wichtiger Baustein für die Synthese von Gallensäuren, Steroidhormonen und verschiedenen fettlöslichen Vitaminen und wird im Rückenmark, Gehirn und Nervengewebe gefunden.[1]

Die Gallenblase konzentriert die aus der Leber produzierte Galle und setzt sie frei, wie es für die Verdauung benötigt wird. Die Gallenblase speichert auch freies Cholesterin, das sich zu Gallensteinen ausscheiden kann, wenn seine Konzentration in der Galle ein kritisches Niveau überschreitet. Die Ansammlung von Gallensteinen kann die Auskleidung der Gallenblase reizen und Schmerzen, Übelkeit und Erbrechen verursachen. Sie können auch Gallengänge blockieren und Komplikationen verursachen, die eine Operation (Cholezystektomie) erfordern, um die Gallenblase mit ihren Gallensteinen zu entfernen. Die folgenden Schritte helfen Ihnen, Cholesterin von Gallensteinen zu isolieren.

Schritte

  1. 1 Erhalten Sie Gallensteine. An einigen Stellen können Sie Gallensteine ​​aus der Abteilung für Chirurgie oder der Abteilung für Pathologie von Krankenhäusern anfordern.
  2. 2 Legen Sie die Gallensteine ​​zwischen Papierblätter[2], dann zerquetsche sie, indem du leicht mit einem Hammer hämmerst.
  3. 3 Sterilisieren Sie die Gallensteine, indem Sie sie mit Haushaltsbleiche (5% Natriumhypochloritlösung) waschen.
  4. 4 Die zerstoßenen Gallensteine ​​auswiegen. Notieren Sie das Gewicht. Dies wird wichtig sein, um abzuschätzen, wie viel Lösungsmittel zu verwenden ist.
  5. 5 Die zerstoßenen Gallensteine ​​in einen Reaktionsbehälter geben.
  6. 6 Gebe 2-Butanon (Methylethylketon), etwa 10 cc pro Gramm zerkleinerter Gallensteine, in den Reaktionsbehälter und erhitze unter leichtem Sieden. Rühre vorsichtig um. Die Lösung wird von dem Gallenpigment Bilirubin schmutzig-gelb bis braun aussehen.
  7. 7 Die heiße Lösung durch eine Papierfilterscheibe / -kegel auf einem Trichter in einen anderen sauberen Behälter filtrieren. Um die Filtration zu erleichtern, ein leichtes Vakuum in den Auffangbehälter geben. Spülen Sie den Garbehälter mit einer kleinen Menge heißem 2-Butanon und übertragen Sie diese Spülung in den Trichter. Das Cholesterin wird vollständig in dem 2-Butanon-Lösungsmittel gelöst, während unlösliche Verunreinigungen (hauptsächlich bestehend aus Bilirubin, einem Metaboliten von Hämoglobin, der den Gallensteinen eine braune Farbe verleiht) während dieses Extraktionsprozesses herausgefiltert werden.
    • Wenn das Filtrat stark gefärbt bleibt, Aktivkohle zugeben und erneut filtrieren.
  8. 8 Zugabe von Methanol (Achtung: extrem giftiger "Holzalkohol") zum Filtrat, etwa 5 ccm pro Gramm zermahlenen Ausgangs-Gallenstein.
  9. 9 Wärmen Sie das Filtrat zu einem leichten Kochen auf, dann fügen Sie Wasser Tropfen für Tropfen hinzu, bis eine sehr schwache Bewölkung erscheint. Das Cholesterin ist sehr lösliches 2-Butanon, weniger löslich in Methanol und unlöslich in Wasser. Die Zugabe des Wassers als Fällungsmittel in die Lösung hilft, die Lösung mit Cholesterin zur Kristallisation zu sättigen. Methanol wird benötigt, um die Lösungsmittel zu überbrücken, da 2-Butanon und Wasser nicht sehr mischbar sind und Methanol sowohl mit Wasser als auch mit 2-Butanon mischbar ist.
  10. 10 Entfernen Sie die Lösung vorsichtig von der Hitze. Wattepolster oder Frottee zum Isolieren um den heißen Behälter wickeln, um eine langsame Abkühlung zu ermöglichen, und dann ungestört auf Raumtemperatur abkühlen lassen.
  11. 11 Einmal bei Raumtemperatur auspacken und den Behälter in Eis abkühlen, damit mehr Cholesterin aus der Lösung auskristallisieren kann.
  12. 12 Sammeln Sie das Cholesterin durch Filtration. Die Ausbeute beträgt große farblose kristalline Platten und Nadeln von Cholesterin, etwa 75% der zerkleinerten Gallensteine. Speichere das Filtrat. Wenn eine größere Ausbeute erwünscht ist, kann man eine zweite Ernte von geringerer Reinheit erhalten, indem man das Filtrat kocht, Wasser tropfenweise hinzufügt und den Kristallisationsprozeß wiederholt.