Apotheker und Chemiker begegnen in ihrer Arbeit vielen natürlich vorkommenden organischen Gemischen und Gemischen chemischer Reaktionen. Daher ist ein HPLC-System (High Performance Liquid Chromatography) eines der wichtigsten Instrumente für jedes Labor. Ein HPLC-Gerät ermöglicht die Trennung und Analyse dieser Mischungen (quantitativ und qualitativ). Bei dieser Art von Säulenchromatographie ist die Teilchengröße der stationären Phase klein genug, so dass es für das Lösungsmittel schwierig ist, sie zu passieren; Um dies zu überwinden, wird ein hoher Druck von 3000-5000 psi angewendet. Es ist die empfindlichste, effizienteste und genaueste Technik.

Schritte

  1. 1 Befolgen Sie die Regeln und Vorschriften und tragen Sie Ihre Schürze.
    • Reinigen Sie die HPLC.
    • Schalten Sie es ein und warten Sie, bis es gestartet ist.
    • Bereiten Sie das Gerät für die Analyse vor.
    • Bewahren Sie das Lösungsmittel / Lösungsmittel in der mobilen Phase im Lösungsmittelbehälter oder Lösungsmittelbehälter auf. Lösungsmittel wird verwendet, um die Komponenten der Mischung zu trennen. In modernen Instrumenten kann die Mischung von Lösungsmitteln als mobile Phase verwendet werden, die Gradientenelution genannt wird. Elution ist die Trennung in Komponenten.
    • Verwenden Sie Methanol-Wasser oder Chloroform-Heptan usw. als Lösungsmittel.
  2. 2 Wählen Sie die Arten von HPLC basierend auf der relativen Polarität der Phasen:
    • Normalphase: Verwenden Sie eine vergleichende polare stationäre Phase als mobile Phase, wenn Sie Normalphasen-HPLC durchführen.
    • Umkehrphasen-HPLC: Verwenden Sie eine weniger polare mobile Phase im Vergleich zur stationären Phase. Im Allgemeinen wird eine Umkehrphase verwendet.
  3. 3 Feed die Daten in das System oder programmieren Sie die HPLC.
    • Weisen Sie die Nummer den Lösungsmitteln zu, wenn Sie sich für die Gradientenelution entscheiden.
    • Geben Sie die Durchflussrate an.
    • Regulieren Sie den Druck der Pumpe.
  4. 4 Analysiere deine Probe.
    • Fügen Sie Ihre Probe in das Injektorsystem hinzu. Dies ist der Mechanismus, der die Probe (das zu trennende Gemisch) in das System einführt.
    • Laden Sie die stationäre Phase in die Säule.
    • Starten Sie die HPLC, indem Sie auf die Startschaltfläche auf dem Computerbildschirm klicken.
    • Warten Sie einige Zeit auf die Trennung der Mischung in Komponenten. Die Retentionszeit ist die Zeit, die das Lösungsmittel benötigt, um die Komponenten zu trennen, was der Zeit entspricht, in der Sie das Gemisch in die Säule geben, bis es detektiert / analysiert wird.
  5. 5 Entwickle deine Komponenten. Warten Sie, bis Ihre Mischung in ihre Komponenten getrennt wurde. Dies wird als Entwicklung bezeichnet, wenn der Probeninhalt vom Detektor detektiert wird.
  6. 6 Beobachte das Ergebnis. Sehen Sie sich die Trennung der Komponenten an, die im Diagramm erkannt und aufgezeichnet wurden. Es wird verschiedene Peaks geben, die den Komponenten und ihrer Konzentration entsprechen.
  7. 7 Wende deine Erkenntnisse auf deine Arbeit an. Es gibt viele Anwendungen von HPLC in der Pharmazie, in der Chemie und in der Lebensmittelproduktion. Einige der wichtigen Anwendungen folgen.
    • Verwenden Sie es für die qualitative Analyse, indem Sie die unter identischen Bedingungen beobachtete Retentionszeit vergleichen.
    • Nutzen Sie die HPLC zur quantitativen Analyse, z. B. zur Bestimmung der Konzentration von Komponenten.
    • Analysieren Sie die Lipidtrennung.
    • Verwenden Sie es für Antworten in der forensischen Arbeit an Kriminalitäts- / Giftfällen.